期刊简介
本刊是以临床医学为主要内容的自然科学学术期刊。1997年先后荣获广东省第二届优秀科技期刊（二等奖）、首届穗版期刊评比优秀期刊等称号
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- 杂志名称：广州医药杂志
- 主管单位：广州市卫生局
- 主办单位：广州市第一人民医院
- 国际刊号：1000-8535
- 国内刊号：44-1199/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：广东省第二届优秀科技期刊二等奖（97）期刊收录：国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中)
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌CHIPS基因的克隆、序列分析及原核表达
容莉莉；杨镒宇；关锐梨；关小珊；邓秋连；谢永强；周珍文
关键词：MRSA, CHIPs, 克隆, 原核表达
摘要：目的 对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)趋化抑制蛋白(CHIPS)进行扩增、克隆、序列分析、原核表达及纯化,为后续的疫苗研究奠定基础.方法 根据GenBank中趋化抑制蛋白(CHIPS)的序列,设计一对特异性引物,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增CHIPS基因,纯化DNA进行EcoRI、XhoI双酶切鉴定及测序鉴定,并将CHIPS亚克隆入表达载体PET-28α,转化感受态大肠杆菌BL21,对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导表达重组蛋白,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证重组蛋白的表达.结果 以金黄色葡萄球菌临床儿童分离株基因组为模板,成功扩增CHIPS基因,基因大小为450bp；重组PET-28a(+)-CHIPS双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示CHIPS在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.98％.经IPTG诱导后,pET-28a(+)-CHIPS/BL21在相应分子量(17kDa)可见融合蛋白在上清表达,免疫印迹检测到目的蛋白.结论 成功从儿童分离株MRSA中构建了CHIPS的原核表达系统,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为后续的疫苗研究奠定基础.
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